沙参麦冬颗粒中正丁醇部位化学成分的研究

　　[摘要]目的：研究沙参麦冬颗粒中正丁醇部位的化学成分。方法：利用溶剂萃取法、大孔树脂柱层析法、硅胶柱层析法、半制备高效液相色谱法等多种分离手段进行分离纯化，并结合理化性质、核磁、质谱等数据进行结构鉴定。结果：从该复方的正丁醇部位分离出10个化合物，分别鉴定为：环(丙氨酸-脯氨酸)(1)，间苯二酚(2)，对羟基苯乙醇(3)，腺嘌呤(4)，2’-脱氧腺苷(5)，腺苷(6)，次黄嘌呤(7)，icarisideB1(8)，酪氨酸(9)，L-色氨酸(10)。结论：其中化合物(1)、(2)、(4)、(5)、(7)未在复方单味药材中被发现，均为首次从该复方药材中分离得到。

　　[关键词]沙参麦冬颗粒;正丁醇部位;化学成分

　　沙参麦冬颗粒是在经典名方沙参麦冬汤的基础上，开发成中成药制剂的新药。沙参麦冬汤最早源于清代名医吴鞠通的《温病条辨》，为治疗肺阴虚的经典名方药，由北沙参、麦冬、玉竹、天花粉、白扁豆、甘草、桑叶七味中药组成;沙参麦冬颗粒在此经典名方的基础上，对方中味药做出科学合理的调整，加入适量糊精和阿司帕坦，以90%乙醇制软材制粒。

　　方中北沙参、麦冬为君药，滋养润肺、清热生津;玉竹甘平养阴润燥、天花粉甘寒清热生津，共为臣药;白扁豆、甘草益气培中、甘缓和胃，桑叶清宣燥热、疏达肺络，三药合为佐使;诸药配伍共奏甘寒生津、清养肺胃之功效[1]。近年来，国内外对沙参麦冬汤进行了广泛的研究，但主要集中在药理和临床疗效上，而无关于复方化学物质基础及其治疗咳嗽的作用机制的研究。该复方的正丁醇部位提取物有较好的止咳疗效，因此对正丁醇部位的化学成分进行深入的研究，为研究其治疗咳嗽的作用机制奠定基础[2]。

　　1材料

　　1.1试药

　　北沙参、麦冬、玉竹、天花粉、白扁豆、甘草、桑叶均购于安徽敬道药业有限公司，并严格按照《中国药典》的要求鉴定药材，均为合格药材。

　　1.2仪器与试药

　　高效液相色谱分析仪(日本岛津公司);半制备型高效液相色谱仪(Ultimate3000，美国戴安，VWD、DAD检测器);TU1901紫外分析仪(北京普析有限公司);全数字化超导核磁共振波谱仪(AVANCEⅢHD-500MHz，AVANCEⅢHD-600MHz，德国Bruker);QExactive四级杆-静电场阱高分辨液质联用仪(赛默飞世尔科技有限公司);半制备型色谱柱(SilGreenODS-C18，250mm×10mm，5μm);分析型色谱柱(SilGreenODS-C18，250mm×4.6mm，5μm);HP-20型大孔树脂(武汉申试欣有限公司);柱色谱用硅胶(200～300目、300～400目，青岛海洋化工公司);实验所用化学试剂均购于国药集团，均为分析纯或色谱纯。

　　2方法

　　2.1提取

　　34倍处方量药材56kg，加水煎煮2次，每次10倍量水，煎煮1h，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至浸膏，所得沙麦浸膏为28kg。依次用等体积的乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取该浸膏，得到水饱和正丁醇部位浸膏828.5g。将该部位浸膏过HP-20型大孔树脂，分别用30%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、100%乙醇等体积冲洗，得到30%乙醇部位浸膏211.9g。

　　取四个乙醇部位浸膏适量溶解，注入高效液相色谱仪，与乙酸乙酯部位浸膏的色谱图对比，发现30%乙醇部位与乙酸乙酯部位的化学成分重复最少，因此选用30%乙醇部位作为研究对象。拌以等量硅胶(200～300目)，经硅胶柱色谱(200～300目)，以二氯甲烷-甲醇(9∶1→0∶10)梯度洗脱，TLC检测后合并相同组分，共收集到10个馏分(Fr.1→Fr.10)。2.2分离Fr.1(4.0g)经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇(9.5∶0.5→9∶1)梯度洗脱，得到3个亚馏分(Fr.1-1～1-3);Fr.1-1(0.954g)经半制备HPLC(流动相为90%甲醇)分离纯化得到化合物1(4.8mg)、2(5.6mg)、3(4.6mg)。Fr.4(27.09g)经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇(9∶1→7∶3)梯度洗脱，得到12个亚馏分(Fr.4-1～4-12);Fr.4～7(0.23g)经半制备HPLC(流动相为80%甲醇)分离纯化得到化合物4(3.1mg)、5(5.2mg)、8(1.6mg);Fr.4～8(1.76g)经半制备HPLC(流动相为95%甲醇)分离纯化得到化合物6(5.8mg)。Fr.3(18.04g)经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇(9∶1→8∶2)梯度洗脱，得到6个亚馏分(Fr.3-1～3-6);Fr.3～5(1.16g)经半制备HPLC(流动相为85%甲醇)分离纯化得到化合物7(2.2mg)。Fr.7(4.59g)取0.5g经半制备HPLC(流动相为85%甲醇)分离纯化得到化合物9(1.6mg)、10(7.4mg)。

　　3结构鉴定化合物

　　1：淡黄色粉末，可溶于甲醇，mp170～172℃。1H-NMR(500MHz，DMSO)：δ：8.13(1H，S，Ala-NH)，4.17(1H，t，J=8.0Hz，Proα)，4.09(1H，dd，J=6.71，13.38Hz，Alaα)，3.41(2H，m，Proδ)，1.78～1.94(4H，m，ProβandProγ)，1.22(3H，d，J=6.9Hz，Alaβ);13C-NMR(125MHz，DMSO)：δ：170.43(Pro-CO)，167.01(Ala-CO)，59.12(Pro-Cα)，50.62(Ala-Cα)，45.29(Pro-Cδ)，28.12(Pro-Cβ)，22.82(Pro-Cγ)，15.73(Ala-Cβ)。将以上数据与文献[3]对照，确定该化合物为环(丙氨酸-脯氨酸)。

　　化合物2：白色粉末，易溶于乙醇，mp109～112℃。1H-NMR(500MHz，DMSO)：δ：9.08(2H，S，OH)，6.94(1H，m，H-5)，6.76(1H，d，H-2)，6.19(2H，brs，H-4，6);13C-NMR(125MHz，DMSO)：δ：158.93(C-1，3)，130.12(C-5)，106.68(C-4，6)，103.01(C-2)。将以上数据与文献[4]对照，确定该化合物为间苯二酚。化合物3：白色粉末，易溶于甲醇，mp89～93℃。

　　1H-NMR(500MHz，DMSO)：δ：6.99(2H，d，H-2，H-6)，6.66(2H，d，H-3，H-5)，3.52(2H，t，H-2’)，2.60(2H，t，H-1’);13C-NMR(125MHz，DM-SO)：δ：155.94(C-4)，130.10(C-1)，129.42(C-2，C-6)，115.42(C-3，C-5)，63.05(C-2’)，38.72(C-1’)。将以上数据与文献[5]对照，确定该化合物为对羟基苯乙醇。

　　化合物4：淡黄色粉末，难溶于水，mp360～365℃。ESI-MSm/z：136[M+H]+，134[M-H]-;1H-NMR(500MHz，DMSO)：δ：12.81(1H，S)为亚胺基信号，8.11(1H，S)和8.09(1H，S)为芳环上孤立的氢信号，7.05(2H，S)为与芳环相连的氨基信号;13C-NMR(125MHZ，DMSO)：δ：156.13(C-6)，152.87(C-2)，150.70(C-4)，139.48(C-8)，119.21(C-5)。将以上数据与文献[6]对照，确定该化合物为腺嘌呤。

　　化合物5：白色粉末，可溶于水，mp187～189℃。1H-NMR(500MHz，DMSO)：δ：8.33(1H，S，H-8)，8.13(1H，S，H-2)，7.27(2H，brs，NH2)，6.34(1H，dd，H-1’α)，5.30(1H，d，3’-OH)，5.23(1H，dd，5’-OH)，4.41(1H，dd，H-3’)，3.89(1H，dd，H-4’)，3.63(1H，ddd，H-5’α)，3.53(1H’，ddd，H-5’b)，2.72(1H，ddd，H-2’β)，2.26(1H，ddd，H-2’α);13C-NMR(125MHz，DMSO)：δ：156.58(C-6)，152.84(C-2)，149.40(C-4α)，140.00(C-8)，119.76(C-5)，88.48(C-4’)，84.42(C-1’)，71.45(C-3’)，62.39(C-5’)，39.06(C-2’)。

　　将以上数据与文献[7]对照，确定该化合物为2’-脱氧腺苷。化合物6：白色粉末，可溶于甲醇，mp234～236℃。1H-NMR(500MHz，DMSO)：δ：8.34(1H，S，H-8)，8.14(1H，S，H-2)，7.30(2H，brs，NH2)，5.88(1H，d，H-1’α)，5.43(1H，d，2’-OH)，5.17(1H，d，3’-OH)，4.61(1H，dd，H-2’β)，4.11(1H，dd，H-3’)，3.97(1H，dd，H-4’)，3.68(1H，ddd，H-5’α)，3.56(1H，ddd，H-5’b);13C-NMR(125MHz，DM-SO)：δ：156.63(C-6)，152.84(C-2)，149.55(C-4α)，140.37(C-8)，119.84(C-5)，88.44(C-1’)，86.37(C-4’)，73.95(C-2’)，71.13(C-3’)，62.15(C-5’)。将以上数据与文献[7]对照，确定该化合物为腺苷。

　　化合物7：白色粉末，难溶于水，mp360～365℃。ESI-MSm/z：137[M+H]+，135[M-H]-;1H-NMR(500MHz，DMSO)：δ：8.09(1H，S，H-2)，7.96(1H，S，H-8);13C-NMR(125MHz，DMSO)：δ：156.67(C-4)，152.53(C-6)，152.05(C-8)，144.99(C-2)，140.91(C-5)。将以上数据与文献[8]对照，确定该化合物为次黄嘌呤。化合物8：白色粉末，可溶于甲醇。

　　1H-NMR(600MHz，DMSO)：δ：1.98(1H，dd，J=13.0，2.5Hz，H-2α)，1.31(1H，H-2b)，4.17(1H，m，H-3)，2.26(1H，dd，J=13.0，1.9Hz，H-4α)，1.30(1H，H-4b)，5.78(1H，S，H-8)，2.12(3H，S，10-CH3)，1.07(3H，S，11-CH3)，1.32(3H，S，12-CH3)，1.29(3H，S，13-CH3)，4.25(1H，d，J=7.8Hz，GlcH-1’)，2.89(1H，m，H-2’)，3.15(1H，m，H-3)，3.05(1H，m，H-4’)，3.11(1H，m，H-5’)，3.67(1H，m，H-6’α);13C-NMR(150MHZ，DMSO)：δ：35.96(C-1)，47.36(C-2)，71.07(C-3)，46.44(C-4)，70.87(C-5)，118.98(C-6)，209.58(C-7)，100.10(C-8)，198.42(C-9)，26.60(C-10)，32.01(C-11)，29.11(C-12)，30.77(C-13)，101.73(GlcC-1’)，73.93(C-2’)，77.19(C-3’)，70.46(C-4’)，77.16(C-5’)，61.45(C-6’)。

　　将以上数据与文献[9]对照，确定该化合物为icarisideB1。化合物9：白色粉末，可微溶于水，mp300～305℃。1H-NMR(600MHz，DMSO)：δ：6.99(2H，d，J=8.3HZ，H-2’，H-6’)，6.66(2H，d，J=8.3Hz)，3.96(1H，q，H-2)，3.17(1H，S，Hα-3)，3.02(1H，dd，J=14.2Hz，5.3Hz，Hb-3);13C-NMR(150MHz，DMSO)：δ：174.86(C-1)，155.82(C-4’)，130.98(C-2’，C-6’)，129.93(C-1’)，115.53(C-3’，C-7’)，55.49(C-2)，35.33(C-3)。

　　将以上数据与文献[10]对照，确定该化合物为酪氨酸。化合物10：淡黄色色粉末，可溶于乙醇，mp285～289℃。ESI-MSm/z：205[M+H]+，203[M-H]-;1H-NMR(600MHz，DMSO)：δ：10.93(1H，S，NH)，7.60(1H，d，J=7.9Hz，H-4)，7.35(1H，d，J=8.1Hz，H-7)，7.21(1H，S，H-2)，7.07(1H，t，J=7.5Hz，H-6)，6.98(1H，t，J=7.4Hz，H-5)，3.33(2H，dd，J=15.0Hz，3.1Hz，H-9，H-8α)，2.98(1H，dd，J=15.1Hz，9.1Hz，H-8b);13C-NMR(150MHz，DMSO)：δ：124.63(C-2)，109.79(C-3)，118.90(C-4)，118.79(C-5)，121.42(C-6)，111.80(C-7)，27.50(C-8)，55.18(C-9)，170.97(C-10)，127.66(C-3α)，136.79(C-7α)。将以上数据与文献[11]对照，确定该化合物为L-色氨酸。

　　4讨论

　　本文利用现代分离技术，从沙参麦冬颗粒的正丁醇部位中分离得到了10个不同类型的化合物。分别为环二肽类成分环(丙氨酸-脯氨酸)(1);苯酚类成分间苯二酚(2);酚醇类成分对羟基苯乙醇(3);4个核苷类成分：腺嘌呤(4)、2’-脱氧腺苷(5)、腺苷(6)、次黄嘌呤(7);单环倍半萜类成分icarisideB1(8);二个氨基酸类成分：酪氨酸(9)、L-色氨酸(10)。其中化合物icarisideB1(8)为淫羊藿次苷类，多报道于淫羊藿增强免疫力、治疗慢性气管炎引起的咳嗽等相关研究中[12]。化合物腺嘌呤(4)、2’-脱氧腺苷(5)、腺苷(6)、次黄嘌呤(7)、酪氨酸(9)、L-色氨酸(10)多报道于名贵药材冬虫夏草止咳生理活性和药效的相关研究中[13]。

　　化合物对羟基苯乙醇(3)最初报道于传统中药材白屈菜的相关研究中，该味药材主要用于治疗慢性气管炎、百日咳等咳嗽症状[14-15]。据此可初步推测，正丁醇部位提取物中的icari-sideB1、核苷类物质(腺嘌呤、2’-脱氧腺苷、腺苷、次黄嘌呤)、氨基酸类物质(酪氨酸、L-色氨酸)、对羟基苯乙醇等可能是沙参麦冬颗粒清养肺胃、止咳祛痰的重要活性成分，为沙参麦冬颗粒治疗咳嗽的研究工作提供了一定的依据。

　　参考文献：

　　[1]XuJM，XuLH.GeneralsituationofShashenMaidongdecoc-tioninthetreatmentofchronicrespiratorydiseases[J].JClinPulmMed(临床肺科杂志)，2008，13(7)：883-884.

　　[2]KuangY，LiB，FanJ，etal.Antitussiveandexpectorantac-tivitiesoflicoriceanditsmajorcompounds[J].BioorganMedChem，2017，26(1)：278-284.

　　[3]WangSM，TanNH，YangYB，etal.CyclodipeptidesfromtherootsofPanaxnotoginseng[J].NatProdResDev，2004，16(5)：383-386.

　　[4]FengWS，GaoL，ZhengXK，etal.PolyphenolsofEuphorbiahelioscopia[J].ChinJNatMed，2009，7(1)：37-39.[5]ParkCH，KimKH，LeeIK，etal.PhenolicConstituentsofAcorusgramineus[J].ArchivesPharmacalRes，2011，34(8)：1289-1296.

　　临床医学论文投稿刊物：《中药与临床》(双月刊)创刊于2010年，是由成都中医药大学主办的综合性药学学术刊物，特点是药物密切联系临床。由多位知名教授任本刊学术指导委员会委员。