时间：2015年08月14日 分类：推荐论文 次数：
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【摘要】 目的筛选荨麻抗风湿活性部位，为荨麻的开发利用提供理论依据。方法萃取法制备不同极性的溶剂部位(石油醚部位、乙醚部位、醋酸乙酯部位、水溶性部位)，小鼠急性耳廓肿法、棉球肉芽肿法筛选抗炎活性部位;小鼠热板法、醋酸扭体法筛选镇痛活性部位。结果醋酸乙酯部位具有显明的抗炎和镇痛活性，能明显抑制二甲苯所致小鼠急性耳廓肿、小鼠棉球肉芽肿及热板、冰醋酸所致小鼠疼痛。结论 醋酸乙酯部位为荨麻抗风湿活性部位，值得进一步研究。
【关键词】 荨麻 风湿 活性部位
荨麻Urtica Fissa E.pritz.在我国被广泛用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎等病的治疗，疗效确切[1]，但作用物质基础研究未见报道;同时荨麻药材也缺乏质量控制指标，因此寻找荨麻活性成分具有十分重要的意义。为研究荨麻抗风湿的活性成分，并为荨麻的质量控制提供科学依据，笔者对荨麻抗风湿的活性部位进行了药理筛选。现将研究结果报道如下。
1 器材
1.1 材料与试剂
作者采于四川省成都温江县通平镇，经作者鉴定为荨麻Urtica fissa E.Pritz，全草晒干备用。乙醇为化学纯，其余化学试剂均为分析纯。
1.2 动物昆明种小鼠(清洁级)，体重(20±2)g，由复旦大学医学实验动物中心提供(合格证号：(沪)SCSK20020026)。
1.3 仪器与软件R502B型旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)，AB104S电子天平(深圳君达时代仪器有限公司)。统计软件：PEMS 3.0。
2 方法与结果
2.1 受试组分的制备荨麻干燥全草8 kg，粉碎成粗粉，95%工业乙醇150 L分3次回流提取，提取液合并，回收部分乙醇，室温放置24 h，析出大量硝酸钾结晶，滤去结晶，继续回收乙醇至干得醇浸膏(A)685 g。将醇浸膏悬浮于水，用石油醚(30～60℃)萃取3次，2 500 ml/次，减压收尽溶剂得石油醚浸膏(B)306 g;乙醚萃取3次，2 500 ml/次，减压收尽溶剂得乙醚浸膏(C)22 g。继用醋酸乙酯萃取3次，3 000 ml/次，减压收尽溶剂得醋酸乙酯浸膏(D)95 g，母液减压收尽溶剂得浸膏(E)242 g。各组分均用0.5%CMC溶液超声溶解，分别配成50 mg·ml-1的溶液备用。
2.2 各组分的抗炎作用比较
2.2.1 小鼠急性耳廓肿取雄性小鼠60只，随机分6组，每组10只。按表1剂量腹腔注射给药，给药30 min后，用二甲苯0.1 ml均匀涂布于各鼠右耳的正反面，再过30 min后处死，用8 mm打孔器在两耳同一部位扎下左右耳片，精密称重，以右耳的重量减去左耳的重量作为耳廓炎性肿胀度，计算右耳肿胀度及抑制率[2]。结果见表1。可以看出，A，D，E组有显著的抗炎活性，明显抑制二甲苯所致的小鼠急性耳廓肿，其中D的作用最强。而B，C组均无明显抗炎活性。表1 荨麻各组分对小鼠耳廓肿胀的影响(略)
2.2.2 棉球肉芽肿雄性小鼠，在乙醚浅麻醉下腹部去毛消毒。腹部切口，将两个已高压灭菌的5 mg棉球分别植入小鼠两侧腋窝皮下，缝合皮肤后消毒。随机分组，手术当天按表2剂量给药，连续7 d。末次给药1 h后处死小鼠，取出棉球，在70℃烘箱中干燥2 h后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿重量[3]。结果表明，A，D，E组能明显抑制小鼠棉球肉芽肿，D的作用最显著，能显著抑制肉芽组织的增生。结果见表2。表2 荨麻各组分对棉球肉芽肿重量的影响(略)
2.3 各组分的镇痛作用比较
2.3.1 醋酸扭体法将60只小鼠(雌雄各半)，随机分为6组，每组10只，称重并编号。阴性对照组腹腔注射0.2 ml/20 g(体重)生理盐水，按表3剂量给药。在给药60 min后腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 ml/只。观察并记录注射醋酸溶液后15 min内出现扭体反应的次数。实验完毕，计算药物镇痛百分率[4]，结果见表3。可见，A，D，E组均有明显的镇痛作用，能明显减少冰醋酸所致的小鼠扭体次数，其中D组作用最强;A，D组还能明显延缓小鼠扭体的出现。表3 荨麻各组分对醋酸所致小鼠疼痛的影响(略)
2.3.2 热板法选择对55℃热板痛觉反应在10～30 s者60只雄性小鼠，随机分为6组，每组10只。每只小鼠给药前及给药(按表4给予药物及剂量)后30，60，90，120 min测定痛反应潜伏期，计算痛阈提高率[4]。结果见表4。结果证明A，D，E组有明显的镇痛作用，以D组的作用最强。B，C组无明显活性。表4 荨麻各组分对鼠热板致痛反应的影响(略)
3 讨论
荨麻在我国用于治疗风湿、类风湿疗效确切，历史悠久，但对其作用物质基础研究目前尚属空白。本文在前期研究基础上，首次对荨麻的活性部位进行了追踪，确定了其抗风湿活性部位。研究证明该活性部位具有明显的抗炎活性，能明显抑制二甲苯致小鼠急性耳廓肿以及小鼠棉球肉芽肿，提示该活性部位不仅对早期渗出炎症有抑制作用，同时对炎症后期的慢性结缔组织增生也有较强的抑制作用;此外该部位还具有明显的镇痛活性，能明显抑制热板、冰醋酸所致小鼠疼痛，表明该活性部位不仅对炎性疼痛具有抑制作用，同时对其他诱因引起的疼痛也有一定的抑制作用。证明该活性部位有利于风湿、类风湿炎症及疼痛的缓解，为荨麻抗风湿的活性部位。
此外，我们还对荨麻抗风湿活性部位的化学成分进行了研究，从中分离并鉴定了山柰酚3OβD吡喃葡萄糖苷、咖啡酸、绿原酸、东茛菪苷、东茛菪内酯、山柰酚3O芸香糖苷、槲皮素7OβD吡喃葡萄糖苷、异鼠李素3O芸香糖苷等多个黄酮类及酚酸类成分[5]，其中东茛菪苷、东茛菪内酯已被证实具有明显镇痛活性，槲皮素、咖啡酸、绿原酸等具有明显的抗炎作用和免疫调节作用。这进一步提示醋酸乙酯部位为荨麻治疗风湿的活性部位，黄酮及酚酸类成分为荨麻抗风湿的活性成分。对该部位进行深入研究具有重要意义，可为荨麻的质量控制及抗风湿的作用机理研究提供科学依据。
本研究采用萃取方法分离制备活性部位，其抗炎、镇痛作用明显优于其他部位且具有统计学意义，表明采用萃取方法分离荨麻抗风湿活性部位的方法不仅简便，而且可行。
【参考文献】
[1]王梦月，刘 瑛，卫莹芳，等.川产荨麻药理作用的初步研究[J].中国民族民间医药杂志，2001，4：229.
[2]陈 奇.中药药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：70.
[3]杨 峰，崔祝梅，张继众，等.前列泰片对前列腺增生及抗炎镇痛作用的实验研究[J].中成药，1994，16(4)：38.
[4]徐叔云，卞如濂，陈 修. 药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：882.
[5]王梦月，卫莹芳，李晓波.荨麻抗风湿活性部位的化学成分研究[J].中草药，2006，37(9)：1140.