食品中空肠弯曲菌定量检测结果的不确定度评定

　　【摘要】目的：分析食品中空肠弯曲菌定量检测结果的不确定度评定。方法：根据《国家食品安全风险评估中心2019年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》展开样本测定，由JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》探究不确定度来源，并计算不确定度各分量，分析食品中空肠弯曲菌定量检测结果的不确定度评定。结果：电子天平、玻璃量器、移液器、重复检测相对标准不确定度0.0011545、0.0057733、0.0034640、0.01739965;平板计数方式合成不确定度、拓展不确定度为0.01869263、0.0373852。结论：通过逐一评定电子天平、玻璃量器、移液器、样本重复检测等产生的不确定度可对食品中空场弯曲菌不确定度作出有效估测，对提高检验结果有效性具有积极作用。

　　【关键词】样本重复检测;玻璃量器;评估不确定度

　　空肠弯曲菌菌体轻度弯曲与逗点状相似，长1.5-5um，宽0.2-0.8um。菌体一端、两端有单鞭毛，运动活泼。抵抗力较弱，易为干燥、直射日光、弱消毒剂杀灭[1-2]。为牛、羊、狗及多种禽类寄居菌。可使蔬菜、水果、多种熟食、牛奶等受到此菌污染，导致人类中毒。为一种人畜共患病病菌，导致人、动物发生多种疾病，且是食物性病原菌，认为与全世界人类细菌性腹泻有较大关联。测量不确定度在一定程度上反映测量结果的质量，不确定度越小，实验结果与真实值越接近。本研究通过样品测定探究不确定度来源，如下文。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　根据《国家食品安全风险评估中心2019年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》展开样本测定，由JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》探究不确定度来源，并计算不确定度各分量。

　　1.2方法

　　根据有关弯曲菌检验操作程序第二法平板计数方式展开弯曲菌检测，选取空肠弯曲菌标准菌株菌悬液加入适量空肠弯曲菌阴性禽胴体内，倒入适量蛋白胨水后放在一定速度的振荡器上振荡15min，严格遵守无菌操作要求将禽胴体取出，余下液体为待测液样本原液。使用合适移液器吸取适量待测原液倒入适量生理盐水内，摇晃确定混合充分，得到第一份具有一定比例的匀液。将得到的具有一定比例的匀液再加入适量生理盐水，重复以上步骤，再次得到一定比例的匀液。

　　在制备样本匀液过程中，每进行一次递增稀释，需更换一次无菌吸头。选2个稀释度合适的样本匀液，每份样本匀液稀释度为100uL，迅速涂布在选择性琼脂平板上，在每个稀释度进行平行接种。放于合适条件下，培养48h。在可疑菌落数在15-150CFU/板的稀释度相同的两块平板上选取不少于5个菌落，在选取的菌落上，划线接种哥伦比亚血琼脂展开纯培养，培养条件同之前。

　　1.3临床评价

　　观察电子天平、玻璃量器、移液器等样品称量、重复性检验、食品中空肠弯曲菌平板计数方式合成不确定度、拓展不确定度等实验检测结果。

　　结果

　　2.1样品称量不确定度评定

　　电子天平、玻璃量器、移液器不确定引入：经研究发现使用电子天平称量1000g样品共需称量2次，不确定引入：标准不确定度=0.2886750;相对标准不确定度=0.0011545。：经研究发现使用玻璃量器量取500ml缓冲蛋白胨，根据量筒允许最大误差，不确定引入：标准不确定度=2.8867511;相对标准不确定度=0.0057733。经研究发现使用移液器倍比稀释2次、加样4次，不确定引入：标准不确定度=0.5773501;相对标准不确定度=0.0034640。

　　2.2样本重复检测不确定度引入

　　经研究发现urel(重复检测)=0.01739965。

　　2.3食品中空肠弯曲菌平板计数方式合成不确定度、拓展不确定度

　　经研究发现，合成不确定度需综合电子天平、玻璃量器、移液器及重复检测的不确定度结果，得到此次实验的U(合成)=0.01869263;选取置信概率P为95%，确定包含因子K为2 ，计算拓展不确定度，得到此次实验的拓展不确定度(U95rel)=0.0373852。

　　食品论文投稿期刊：《食品安全导刊》杂志是由中国商业联合会主管，中国商业股份制企业经济联合会及北京肉类食品协会联合主办，是国家新闻出版总署正式批准的一本全面关注食品安全政策、标准、技术、信息的行业期刊。

　　3讨论

　　不确定度来源在微生物检测中较分散，与实验使用试剂质量、设备、环境等因素均有联系。本次实验严格遵照相关弯曲菌检验流程进行操作，选用人工污染样本，可将“基质”对检测结果的影响忽视[3]。对使用的试剂、培养基等都展开了质量控制，对添加、没有添加阳性菌株的样本进行对比分析，监控实验操作环境，对实验使用的高压灭菌器、移动紫外车及微需氧工作站等仪器设备都进行检验，确保合格后进行使用。

　　本研究电子天平、玻璃量器、移液器、重复检测相对标准不确定度0.0011545、0.0057733、0.0034640、0.01739965;平板计数方式合成不确定度、拓展不确定度为0.01869263、0.0373852。提示重复检测对合成不确定度贡献高于电子天平、玻璃量器、移液器，玻璃量器对合成不确定度贡献次于重复检测，电子天平、移液器对合成不确定度贡献较低。

　　表明微生物实验使用的试剂、相关仪器设备及检验人员操作步骤等均会对微生物实验检验结果有效性参数一定程度影响。通过了解对微生物实验检验结果产生影响的因素，在微生物实验实施过程中进行对应质量控制，减少微生物实验使用的试剂、相关仪器设备及检验人员操作步骤等对检验结果的影响，提高微生物实验检验结果准确、有效性。

　　综上所述，通过逐一评定电子天平、玻璃量器、移液器、样本重复检测等产生的不确定度可对食品中空场弯曲菌不确定度作出有效估测，对提高检验结果有效性具有积极作用。

　　参考文献：

　　[1]熊素平, 聂晶晶, 陈凯,等. 食品中空肠弯曲菌定量检测结果的不确定度评定[J]. 医药论坛杂志, 2019, 40(10):111-114.

　　[2]彭志兰, 林吉恒, 黄朱梁,等. 基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法快速鉴定餐饮食品中的空肠弯曲菌[J]. 食品安全质量检测学报, 2020, 11(09):292-297.

　　[3]申进玲, 赵丽娜, 蒋原,等. 含内标的多重实时PCR法同时检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌[J]. 食品安全质量检测学报, 2019, 10(07):110-118.

　　作者：张粉娥 1 郭强 2